新冠大流行截止2021年1月1號已導致全球超過9400萬例病例和200萬例死亡。在尋找有效藥中，由Gilead Sciences研發(fā)的瑞德西韋是美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）和歐洲藥品管理局（EMA）批準的第一種藥物。

據(jù)報道，僅在2020年第3季度，該藥的銷售量為8.73億美元。迫于全球的形勢，大幅提高該藥的產(chǎn)量才能滿足全球需求。瑞德西韋的生產(chǎn)工藝非常復雜，據(jù)報道，考慮到原材料的采購，首批產(chǎn)品需要9個月以上才能完成。而連續(xù)加工在簡化工藝中可起著至關重要的作用。實際上，在這條路線中的某些步驟中，已經(jīng)在工廠級生產(chǎn)規(guī)模使用了連續(xù)流技術。

在安全性，非對映選擇性，過程控制和時空產(chǎn)量方面提供了改進?？梢灶A見，通過將其他合成步驟也轉(zhuǎn)換為連續(xù)流模式，這些優(yōu)點將得到補充，而其他優(yōu)點也將得以實現(xiàn)。

該藥物的合成路線如圖1所示，該路線始于鹵化吡咯并嗪胺1 / 1a與芐基保護的D-核糖-1,4-內(nèi)酯2 發(fā)生有機金屬介導的C-糖基化，以提供關鍵中間體3。然后再需要五步來提供API 瑞德西韋。已有文獻報道在室溫下連續(xù)流中進行的Grignard反應，其停留時間少于一分鐘。在沒有添加劑的情況下，以47％收率得到了產(chǎn)品。

圖1 瑞德西韋的合成路線

而另一方面，基于有機鋰的反應可以使用價格更便宜且質(zhì)量更高的雜芳基溴化物1代替其碘化物類似物作為有機金屬前體。

有文獻報道使用1,2-雙（氯二甲基硅基）乙烷（BCDSE）作為雙齒硅基保護基，在N，N-二異丙基胺的存在下與有機鋰試劑反應，盡管反應溫度低（-78°C）且反應時間長，但該方法迄今為止提供了最高的收率（74%）。

實際上，與較溫和的格氏試劑相比，微反應器和連續(xù)處理技術更適用于處理有機鋰試劑，因為可以極大程度的改善后者的傳質(zhì)和傳熱。

閃速化學（flash chemistry）領域擅長于處理流動中異?？焖俚姆磻ǚ磻^程最多幾秒鐘），并已在許多情況下得到證明，可以實現(xiàn)原本不可能或不切實際的化學反應。

特別令人感興趣的是閃速化學的可擴展方式，這種方式可以規(guī)避在藥物制造開發(fā)過程中面臨的的規(guī)模擴大問題。而連續(xù)流化學可以同時減輕在合成過程開始時因這一具有挑戰(zhàn)性的轉(zhuǎn)變而給供應鏈造成的負擔。

Graz大學的Kappe等人描述了通過閃速化學發(fā)展連續(xù)流的方法，使用7-溴吡咯烷-嗪胺1作為有機鋰前體閃速合成糖基化吡咯烷嗪胺3。通過應用微反應器技術，工藝溫度可以從-78℃顯著提高到-30℃。

此外，整個轉(zhuǎn)化過程的反應時間可以大大減少到僅8 s。該結(jié)果最近發(fā)表在Org. Process Res. Dev. 期刊上（https://dx.doi.org/10.1021/acs.oprd.1c00024）。

實驗方案

1. C-糖基化釜式反應研究

7-溴吡咯并三嗪胺1與2,3,5-三-O-芐基-D-核糖內(nèi)酯2的C-糖基化反應包括三個步驟。在第一步，伯胺1被硅基保護基團（例如BCDSE）保護，釋放出2當量HCl，并在第二步被有機鋰堿中和。需要第三當量的有機堿才能執(zhí)行Li-Br交換并獲得雜芳基鋰1-Li。最后，對內(nèi)酯2的親核進攻產(chǎn)生所需的糖基化吡咯并三嗪3。

最初，為了檢查該工藝轉(zhuǎn)換為連續(xù)流的潛在問題，作者首先開始了釜式反應研究。首先，原料1在已經(jīng)報道的0.2 M反應濃度下是混懸液，因此必須將濃度減半以確保原料1的溶解度。

另一個重要的問題是加入BCDSE后會形成固體，這可能會導致流動反應器內(nèi)發(fā)生堵塞。先前對固體進行的表征表明，該沉淀并不是受保護的胺，因為在0 ppm左右沒有信號（因為1H NMR光譜中該信號對應SiCH3）。

作者認為該沉淀物是雜環(huán)1的質(zhì)子化形式，當1被質(zhì)子化后，上保護基反應不能發(fā)生。在環(huán)境溫度下觀察到固體形成需要約5 s，因此必須要在很短的時間內(nèi)引入堿用以清除HCl。不過，在流動裝置中可以很容易地實現(xiàn)并控制這種短的停留時間。

在釜式反應中，作者發(fā)現(xiàn)緩慢添加n-BuLi可獲得良好收率。假定副反應由于傳熱不良，導致容器中出現(xiàn)局部熱點，傳質(zhì)不良，進而導致局部化學計量失衡。

這兩種作用都可能導致鋰化中間體的分解，并隨著反應規(guī)模的增加而放大。但是，在連續(xù)流中進行反應會增強傳熱和傳質(zhì)，因此有望以可擴展的方式進行有效的反應。

雜芳基鋰1-Li對內(nèi)酯的親核加成是面臨另一個關鍵挑戰(zhàn)。過去的研究表明內(nèi)酯的α質(zhì)子可被有機金屬試劑迅速去質(zhì)子化，導致鋰化雜環(huán)1-Li猝滅。已經(jīng)證明，當使用格氏試劑時，路易斯酸添加劑可以促進親核進攻。

然而，不溶性和稀有金屬物質(zhì)（NdCl3和四丁基氯化銨）增加了該工藝的成本和復雜性。有機鋰物質(zhì)由于其具有較高親核性，因此比格氏試劑具有更高的親核加成選擇性。在先前開發(fā)的格氏試劑的工藝中，作者已經(jīng)觀察到核糖內(nèi)酯加成物的開鏈中間體受到親核攻擊而產(chǎn)生的副產(chǎn)物。

而有趣的是，使用有機鋰方法時，作者并未觀察到上述的副反應。這可能是由于雜芳基鋰1-Li的親核性增強，促進與內(nèi)酯2的快速反應，而不是與親電子性較高的酮中間體發(fā)生優(yōu)先反應，或者可能是由于Mg抗衡離子可以使溶液中存在較高比例的開鏈酮形式。

為了了解去質(zhì)子化相對于Li-Br交換的相對速率，作者進行了釜式實驗，其中一次添加了1當量n-BuLi。出人意料的是，在加入1當量正丁基鋰后，已經(jīng)交換了34％的溴化物，

加入2當量后，交換了62％。這意味著在這些條件下，兩個反應的速率沒有顯著差異。

但是，為了避免形成的雜芳基鋰發(fā)生內(nèi)部淬滅，作者認為應將去質(zhì)子化和Li-Br交換這兩個過程分步進行。由于已知n-BuLi在去質(zhì)子的同時可以快速進行Li-Br交換，作者試圖先使用N，N-二異丙基氨基鋰（LDA）去質(zhì)子，而LDA可以避免在該階段時就發(fā)生Li-Br交換，而繼續(xù)反應一段時間后再加入n-BuLi來解決上述問題。

2. 初始連續(xù)流過程

根據(jù)上述這些觀察結(jié)果，作者設計了一種連續(xù)流裝置（圖2），確保在添加LDA（防止形成鹽）之前保證雜環(huán)1和BCDSE的反應時間，然后再添加n-BuLi（以實現(xiàn)鋰-溴交換）。

作者選擇了連續(xù)流微反應器Ehrfeld，F(xiàn)lowPlate，Hastelloy C-22 /sapphire ，該反應器配備有小體積的混合板（TG混合器，內(nèi)部容積為350μL，通道寬度為0.2-0.5 mm）。這有助于在可放大的系統(tǒng)中進行快速混合和有效的傳熱。

圖2初步的連續(xù)流結(jié)果

將雜環(huán)1（THF中0.1 M）與BCDSE（THF中1.0 M）混合，通過在101μL反應器體積后與LDA（THF /己烷中1.0 M）相結(jié)合，成功實現(xiàn)了微反應器中的操作。然后，引入n-BuLi（己烷中1.6 M）形成雜芳基鋰1-Li，將其用內(nèi)酯2淬滅，得到所需的糖基化吡咯烷嗪胺3。

在第一次嘗試中，作者實現(xiàn)了54％的測定產(chǎn)率，同時包含21％的質(zhì)子化雜環(huán)副產(chǎn)物1-H。盡管未觀察到固體形成，但雜芳基溴1的溶解度遠低于其碘化物類似物1a，因此必須使其濃度低至0.1M。

然后進行流動實驗以研究該設置中的反應速率。當所有流速乘以1.5（總停留時間= 5.3 s），反應收率不變，這意味著這些停留時間都足以使得每個步驟中能夠完全反應。相反，將流率減半（總停留時間= 16 s）導致產(chǎn)品3的收率差很多（31％）。這意味著在低流量下較差的混合和傳熱會嚴重影響實驗的效果。

與內(nèi)酯化步驟相比，內(nèi)酯2上雜芳基鋰1-Li的親核加成預期進行得較慢，進而作者對停留時間的更詳細研究。引入內(nèi)酯2后，安裝了毛細管反應器，可提供額外的38 s停留時間。 當將毛細管反應器升溫到-40或-20°C時，反應的產(chǎn)率與先前的結(jié)果一致，這表明親核加成反應在微反應器板的最初5.3 s內(nèi)已經(jīng)完成。因此，額外的毛細管反應器被證明是不必要的（圖2，條目4和5）。

在連續(xù)流中，提高耐熱性是改進有機鋰反應的關鍵。雖然在釜式中糖基化過程需低溫（-78°C），但在-50至-30°C之間的連續(xù)流裝置中也得到了基本一致的結(jié)果（54-56％的收率）（圖2，條目6和7）。進一步施加-20°C的高溫會使產(chǎn)率降低到50％（條目8），因此選擇了-30°C的最佳反應溫度用于進一步的實驗。

3. 連續(xù)流工藝的進一步優(yōu)化

如作者最初的實驗所示（圖2），LDA充當強堿，可保持溴化物的穩(wěn)定性（圖3a）。因此，將LDA用于脫質(zhì)子化，然后進行n-BuLi進行Li-Br交換被發(fā)現(xiàn)是最合適的組合。LDA篩選的化學計量在1到2當量之間（圖3b）。增加LDA的量增加了產(chǎn)物3的產(chǎn)率，同時減少了質(zhì)子化1-H的量。

圖3 雜芳基鋰的內(nèi)部淬滅及其通過改變LDA化學計量進行預防（a）由于快速的Li-Br交換而引起的內(nèi)部淬滅至1-H的機理。（b）采用不同的LDA化學計量比。嘗試改變?nèi)ベ|(zhì)子化和鋰-鹵素交換步驟的實驗結(jié)果

作者發(fā)現(xiàn)在糖基化過程中，形成的其他主要副產(chǎn)物是鋰化雜環(huán)1-Li對硅基保護基團的親核攻擊所致（圖4a）。中間體5繼續(xù)與有機鋰反應，或在淬滅/ HPLC分析期間簡單地水解，形成副產(chǎn)物6-8。作者認為，N-Si鍵（與C-Si鍵不同）在水的存在下是不穩(wěn)定的，因此也可能存在其他無法檢測到的中間物種。

圖4雜芳基鋰與硅基氯的副反應（a）作者觀察到的雜芳基鋰與BCDSE反應產(chǎn)生的副產(chǎn)物，根據(jù)LCMS分析提出了結(jié)構。（b）篩選BCDSE化學計量以最大程度減少副產(chǎn)物6-8形成

這些副產(chǎn)物的存在暗示了BCDSE保護基可能存在不完全消耗的問題。為了解決這個問題，作者將BCDSE的化學計量從1.0當量逐漸降低到0.5當量（圖4b）。

出人意料的是，總收率未受到明顯影響，并且硅基的副產(chǎn)物的數(shù)量減少。為了便于純化（消除硅基的副產(chǎn)物）和降低成本，作者決定使用0.6當量進行操作。

由于即使使用亞化學計量的BCDSE也可以實現(xiàn)穩(wěn)定的流動過程，因此作者在不存在任何保護基的情況下，分批和流動地進行了實驗。使人驚訝的是，釜式反應的產(chǎn)率為20％，流動化反應的產(chǎn)率為49％。

不幸的是，在沒有硅基保護基的情況下，1與n-BuLi的反應幾乎立即形成了固體，這使得該流動過程不可能長時間運行。

4. 過程穩(wěn)定性實驗

在對反應參數(shù)進行其他精細調(diào)整之后，作者已經(jīng)開發(fā)出產(chǎn)品達到60％分離收率的反應條件，總停留時間僅為8 s（圖5a）。為了證明該過程在更長的處理時間內(nèi)的穩(wěn)定性，作者進行了2小時的長時間運行，每5分鐘進行一次采樣（圖5b）。

實驗結(jié)果表明該過程是非常穩(wěn)定，在整個操作期間，產(chǎn)率僅變化<2％。在該實驗過程中，系統(tǒng)的壓降略有增加，從1.5巴增加到2.9巴?？赡茉蚴求w系中逐漸產(chǎn)生了固體（例如，由痕量水產(chǎn)生的LiOH），但結(jié)果表明收率不會受到影響，并且在進行較大規(guī)模的實驗時可能更易于管理。

圖5優(yōu)化的反應條件和長期穩(wěn)定性的連續(xù)流裝置的示意圖（a）EhrfeldFlowPlate（TG混合器）的示意圖以及反應條件。（b）長期運行期間隨時間變化的反應的結(jié)果

收集反應產(chǎn)物，得到16.9g（收率60％，純度96％）糖基化產(chǎn)物3。在這種情況下，該材料已通過柱色譜法純化，但在放大規(guī)模中可以使用現(xiàn)有的結(jié)晶方法。這相當于8.5 g/h的通量，以及極高的時空產(chǎn)率10.4 kg L-1 h-1。高時空產(chǎn)率清楚地表明了采用閃速化學方法進行這些轉(zhuǎn)化的優(yōu)勢，即使在小型反應器中，較短的反應時間也可以實現(xiàn)高通量。當與放大規(guī)模反應相結(jié)合時，將這種成熟的反應連續(xù)流平臺升級到更大的版本，可節(jié)省大量的成本，時間和能源。

與報道的使用NdCl3和TBACl添加劑的格氏試劑的間歇方法相比，該方法的優(yōu)點在于所需添加劑的成本較低。雖然BCDSE是一個比較奇特的硅基保護基，但對每摩爾1a的加工成本僅為179歐元。與之相對的是，所報告的釜式工藝中每摩爾1a的加工成本為2091歐元。當然，必須指出的是，這些價格并不代表制造規(guī)模下的結(jié)果，但是隨著對無水NdCl3的需求的增多可能會增加大量成本。

實驗結(jié)論

作者探討了基于有機鋰的C-糖基化連續(xù)流合成瑞德西韋的工藝，通過仔細分析反應混合物和添加順序，可以避免在微反應器內(nèi)形成固體。又通過對反應參數(shù)的優(yōu)化，包括硅基保護基和有機金屬試劑的篩選，使得轉(zhuǎn)化中副產(chǎn)物的含量降至最低。

作者通過精確調(diào)整工藝參數(shù)，再加上微反應器中賦予的優(yōu)異的傳熱和傳質(zhì)能力，可在僅8 s的總停留時間內(nèi)進行高度放熱的C-糖基化反應。與釜式反應所需的?78°C相比，連續(xù)工藝在?30°C的更高的過程溫度下，該反應得以成功實現(xiàn)，這將節(jié)省大量能源。

已建立并開發(fā)的連續(xù)流可擴展的反應器系統(tǒng)，具有實現(xiàn)更有效地生產(chǎn)關鍵糖基化中間體和相應API的潛力。

原文：Flash Chemistry Approach to Organometallic C?Glycosylation for the Synthesis of Remdesivir, 2020, Org. Process Res.

Dev（https://dx.doi.org/10.1021/acs.oprd.1c00024）